|
RECONOCIMIENTO DE LAS PROTEÍNAS
MATERIALES - HCl concentrado o acido acético - Alcohol etílico - Solución de CuSO4 al 1% - NaOH al 20% - Clara de huevo o leche - Solución de albúmina al 1-2% - Tubos de ensayo, gradilla - Mechero - Vasos de precipitados - Pipetas a) COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS (con HCl) FUNDAMENTO Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70 ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria. PROTOCOLO 1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3 ml de leche. 2. Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3 ml de HCl concentrado (o bien 5 gotas de ácido acético), y al tercero 2-3 ml de alcohol etílico. Observar los resultados.
b) REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET) FUNDAMENTO Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas (que sirven para su identificación), destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo del Biuret lleva CuSO4 [sulfato de Cobre (II)] y NaOH (sosa). Cuando una proteína se pone en contacto con un medio fuertemente alcalino (álcali concentrado), se forma una sustancia compleja denominada biuret , de fórmula:
la cual, en contacto con una solución de CuSO4 diluída, da una coloración violeta característica, cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo? 2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? 3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína? 4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret? 5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret? 6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? c) DESNATURALIZACIÓN DE LA CATALASA (enzima)
|
